Аннотация

Наиболее эффективно хранение микроорганизмов различных таксономических групп при низких температурах от –12 °С до –150 °С. В статье исследовано влияние низких температур (–12 °С и –18 °С) на жизнеспособность коллекционных штаммов актиномицетов Streptomyces lucensis ВКПМ Ас-1743 и Streptomyces violaceus ВКПМ Ас-1734 – продуцентов ингибиторов гликозидаз в процессе хранения без криопротектора в 15 % растворе глицерина и в 0,9 % растворе натрия хлорида и биосинтетическую способность в процессе ферментации гидролизатов крахмала. Определен титр (КОЕ в 1 см3 исходного инокулята) и ингибиторная активность по отношению к панкреатической α-амилазе. Выявлено, что штаммы Streptomyces lucensis и Streptomyces violaceus в исходных концентрациях клеток 107 и 108 КОЕ/см3 сохранили высокий уровень жизнеспособности в течение четырех месяцев хранения в 15 % растворе глицерина и в 0,9 % растворе натрия хлорида при температурах –12 °С и –18 °С. Наибольшее количество выживших клеток получено при хранении в 15 % растворе глицерина при температуре –18 °С. Установлено, что штаммы Streptomyces lucensis и Streptomyces violaceus, хранившиеся в 15 % растворе глицерина при низких температурах, имеют более высокий уровень ингибиторной активности в культуральной жидкости, чем при хранении в 0,9 % растворе натрия хлорида. Показатель ингибиторной активности был выше у культур, хранившихся в 15 % растворе глицерина при температуре –18 °С, и находился на уровне 2600 ± 200 ИЕ/см3 . Показано, что низкотемпературное хранение Streptomyces не оказывает отрицательного воздействия на жизнеспособность и биосинтетическую активность культур.

Ключевые слова

Штаммы Streptomyces lucensis ВКПМ Ас-1743 и Streptomyces violaceus ВКПМ Ас-1734, низкотемпературное хранение, жизнеспособность, ингибиторная активность, титр

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Сидякина, Т. М. Консервация микроорганизмов в коллекциях культур / Т. М. Сидякина // Сборник научных трудов«Консервация генетических ресурсов. Методы. Проблемы. Перспективы» / Пущинский научный центр. – Пущино, 1991. –С. 81–159.
2. Cвойства конидий штаммов актиномицетов Streptomyces lucensis и Streptomyces violaceus в процессе хранения принизких температурах / Н. Ю. Шарова, Т. В. Выборнова, А. А. Принцева [и др.] // Пищевые системы. – 2018. – Т. 1, № 3. –С. 27–32. DOI: https://doi.org/10.21323/2618-9771-2018-1-3-27-32.
3. Филиппова‚ С. Н. Многолетнее хранение коллекционных культур актинобактерий / С. Н. Филиппова,Н. А. Сургучева, В. Ф. Гальченко // Микробиология. – 2012. – Т. 81, № 5. – С. 682–690.
4. Опыт долгосрочного хранения промышленных штаммов микроорганизмов / А. А. Цуцаева‚ А. Е. Ананьина,Л. М. Балыбердина [и др.] // Микробиология. – 2008. – Т. 77, № 5. – С. 696–700.
5. Чукпарова, А. У. Оценка сохранения жизнеспособности штаммов микроорганизмов при низкотемпературнойконсервации / А. У. Чукпарова // Материалы Всероссийского симпозиума с международным участием «Биологическиактивные вещества микроорганизмов — прошлое, настоящее, будущее» / Московский государственный университет имениМ. В. Ломоносова. – М., 2011. – 131 с.
6. Пат. № 2123044 Российская Федерация, МПК C12N1/04, C12N1/00. Способ длительного хранения естественныхсимбиотических ассоциаций микроорганизмов человека и животных / Шендеров Б. А., Гахова Э. Н., Манвелова М. А. [и др.];заявитель и патентообладатель ОАО «Русский йогурт». – № 98103006/13; заявл.1998-0302; опуб. 10.12.1998.
7. Промышленная микробиология / З. А. Аркадьева, А. М. Безбородов, И. Н. Блохина [и др.]. – М.: Высшая школа,1989. – 688 с.
8. Хранение культур актинобактерий – представителей родов Streptomyces и Nonomuraea методом низкотемпературной консервации / О. Н. Синева, Н. Г. Куликова, С. Н. Филиппова [и др.] / /Антибиотики и химиотерапия. – 2014. – Т. 59, № 11–12. – С. 11–15.
9. Sharova, N. Yu. Amylase inhibitors from Streptomyces lucensis VKPM Ac-1743 and Streptomyces violaceus VKPM Ac1734 / N. Yu. Sharova // Applied Biochemistry and Microbiology. – 2015. – Vol. 51, № 1. – P. 58–63. DOI: https://doi.org/10.1134/ S0003683815010159
10. Патент № 2346042 Российская Федерация, МПК С12N 1/2.0. Штамм актиномицета Streptomyces violaceus – продуцент ингибитора гликозидаз / Шарова Н. Ю., Никифорова Т. А., Позднякова Т. А.; заявитель и патентообладатель ГУ ВНИИПАКК. – № 2006138251/13; заявл. 30.10.2006; опубл. 10.02.2009; Бюл. № 4.
11. Патент № 2355755 Российская Федерация‚ МПК С 12N 9/24. Штамм актиномицета Streptomyces lucensis – продуцент ингибитора гликозидаз / Шарова Н. Ю., Позднякова Т. А., Ходкевич О. А.; заявитель и патентообладатель ГУ ВНИИПАКК. – № 2008101164/13; заявл. 09.01.2008; опубл. 20.05.2009; Бюл. № 14.
12. ГОСТ 10444.15-94. Продукты пищевые. Методы определения количества мезофильных аэробных и факультативноанаэробных микроорганизмов. М. : Стандартинформ, 2010.
13. Ходкевич, О. А. Разработка технологии биосинтеза ингибитора α-гликозидаз актиномицетами рода Streptomyces и применение комплексной добавки на его основе в хлебопечении: дис. … канд. техн. наук: 05.18.07 / Ходкевич Ольга Анатольевна. – СПб, 2009. – 135 с.
14. Акулова, Н. Ю. Ингибиторы α-глюкозидаз из Streptomyces. Выделение и свойства: автореф. дис. … канд. биол. наук: 03.00.04 / Акулова Наталья Юрьевна. – СПб, 1993. – 22 с.
15. Шарова, Н. Ю. Разработка научных основ новых технологий пищевых добавок и ингредиентов с использованием крахмалсодержащего сырья: автореф. дис. … докт. биол. наук: 05.18.07 / Шарова Наталья Юрьевна. – СПб, 2013. – 32 с.
16. Похиленко, В. Д. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития/ В. Д. Похиленко, А. М. Баранов, К. В. Детушев // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинскиенауки. – 2009. – Т. 12, № 4. – С. 99–121.
17. Screening of polar streptomycetes able to produce cold-active hydrolytic enzymes using common and chromogenic substrates / M. Cotarlet, G. Bahrim, T. Negoita [et al.] // Romanian Biotechnological Letters. – 2008. – Vol. 13, № 5. – P. 69–80.